В ходе практикума будет проводиться операция по вживлению электродов и канюли в головной мозг мыши.

Вы познакомитесь с инъекционными и газовыми наркозами, с основными принципам погружения мышей в изофлурановый наркоз и различным способами инъекции животных.

Вы научитесь правильно фиксировать животное в стереотаксисе, подготавливать операционное поле, размечать на нем области интереса, погружать электроды в мозг на необходимую глубину и фиксировать их на голове мыши.

В первой части практикума разбираются:
    • Основные правила обращения с животными: как нужно держать грызунов в руках, содержать их в клетках и планировать ход эксперимента in vivo
    • Принципы поведенческих экспериментов: как минимизировать отвлекающие животного внешние факторы.

Вторая часть практикума посвящена демонстрации поведенческих тестов:
    • Открытое поле позволяет количественно оценить выраженность и динамику элементарных поведенческих актов у грызунов в стрессогенных условиях, возникающих в ответ на помещение животного в новую обстановку. Подсчитывается число стоек, груминга, скорость передвижения животного, число пересечений центральной части поля, пройденная дистанция и многие другие параметры, выбор которых зависит от задач и целей эксперимента.
    • Приподнятый крестообразный лабиринт представляет собой два закрытых и два открытых рукава. С одной стороны, грызуны стараются избегать ярко освещенные открытые участки, с другой стороны, у них есть стремление исследовать новое пространство => тест можно использовать в качестве скрининга тревожного поведения животных, ориентируясь на соотношение времени пребывание грызунов в двух типах рукавов 
    • Тест «Перегородка» количественно оценивает «общительность» (коммуникабельность) экспериментальных животных по числу их подходов к перфорированной перегородке, за которой расположено другое животное. Выбор второго животного зависит от задач эксперимента: это может быть, как знакомый агрессивный самец, так и незнакомая нейтральная мышь
    • Водный лабиринт Морриса – тест на пространственную память. Животное помещается в круглый бассейн, наполненный непрозрачной жидкостью. Грызуну необходимо отыскать платформу, скрытую в толще воды. Спустя некоторое время тест делается повторно – при этом важно не менять расположение спасительной платформы. Оценивается время, за которое грызун спасается от утопления. 
    • Тест «Укрытие» позволяет одновременно оценить количественно уровень тревоги и импульсивности животного, исследовательское поведение, изменение пищевых предпочтений. Грызун помещается в небольшое прямоугольное укрытие, которое находится в углу открытого поля в начале эксперимента. В противоположном углу от укрытия в зоне видимости животного находится корм – пищевой стимул. Оценивается время первого выхода из укрытия, время первого подхода к корму, общее время, проведенное вне укрытия, число «выглядываний» из укрытия и многие другие паттерны поведения.

Практика посвящена электрофизиологическим методам исследования структур мозга у живых животных. Целью данной практики является изучение методов регистрации электрической активности мозга и знакомство с основными принципами электрофизиологии in vivo.

В первой части практикума разбирается типичное устройство электрофизиологической установки. Описываются основные элементы и их характеристики.  Обсуждаются источники помех и возможные способы их устранения.

Во второй части практики участники будут работать с установкой и изучать различные виды электрической активности гиппокампа у живых мышей, такие как тета-ритм и гамма-ритм.

Практические занятия по исследованию препаратов мозга включают разбор следующих тем:

► Принципы устройства электрофизиологической установки для регистрации внутриклеточной и внеклеточной электрической активности.

► Изготовление переживающих срезов.

► Основы метода пэтч-кламп.

► Основы регистрации параметров с помощью флуоресцентных зондов.

Практикум по биохимии включает:

► Принципы проведения биохимических измерений.

► Получение препарата изолированных митохондрий мозга.

► Взятие крови у крыс и мышей для биохимического анализа.

► Принципы определения концентраций веществ с помощью спектрометрии и флуорометрии.

► Измерение активности ферментов в препаратах мозга.

Цель практики - освоение методов фиксации и окрашивания нервной ткани, изготовления срезов и обработкой гистологических изображений.

На примере окраски по Тимму и Нисслю будет продемонстрировано:

• Фиксация ткани мозга

• Изготовление срезов

• Проводка и окраска срезов

• Микроскопирование срезов

• Математическая обработка изображений срезов и интерпретация результатов.

Перфузия животных - важный этап приготовления гистологических препаратов. 

Цель процедуры - получить необходимый орган или его часть, пропитанную формалином или другим фиксатором, и очищенную от крови. Наличие крови в гистологических препаратах портит их качество, закрывая структуру тканей и клеток. 
Для проведения перфузии животное анестезируют и с помощью насоса заменяют кровь в сосудах на формалин. После основного этапа делают оперативный доступ и извлекают необходимый орган. В случае нашей лаборатории чаще всего приходится извлекать мозг. 
На практике мы пройдём через все этапы процедуры - научимся делать внутримышечный укол, получать доступ к левому желудочку сердца и аккуратно вводить в него иглу, декапитировать мышей и извлекать мозг из черепной коробки.